無菌作基本技術(shù)

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌作臺（laminar flow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70% ethanol擦拭無菌作抬面，并開啟無菌作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)作。
每次作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。
無菌作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其他實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70% ethanol擦拭后才帶入無菌作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域作。
小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方作實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺，以70% ethanol擦拭無菌作臺面。作間隔應(yīng)讓無菌作臺運(yùn)轉(zhuǎn)5-10分鐘后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之作。
工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌作臺（至少Class II）。作過程中，應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，并避免尖銳針頭之傷害等。
CO2培養(yǎng)箱：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)是否需二氧化碳供應(yīng)，依細(xì)胞培養(yǎng)基種類而異。
2. 若細(xì)胞培養(yǎng)基以碳酸鹽為pH緩沖系統(tǒng)，則需補(bǔ)充二氧化碳以達(dá)到緩沖作用，應(yīng)培養(yǎng)細(xì)胞于二氧化碳環(huán)境下，例如使用二氧化碳培養(yǎng)箱（常用之比例為5% CO2,95% air），或是灌入適量二氧化碳至培養(yǎng)容器內(nèi)，放入一般培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。為使二氧化碳能夠流通，培養(yǎng)瓶（例如T-flask）放入二氧化碳培養(yǎng)箱時(shí)應(yīng)松開瓶蓋，或使用透氣瓶蓋。取出觀察時(shí)，則關(guān)緊瓶蓋，以避免污染。
3. 若細(xì)胞培養(yǎng)基含有其他緩沖物質(zhì)而不需二氧化碳供應(yīng)，則放在一般培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。
4. 培養(yǎng)箱內(nèi)可放置水盤以維持適量之溼度，避免因培養(yǎng)基蒸發(fā)造成鹽類濃度之變化而影響細(xì)胞生長。
定期檢測下列項(xiàng)目：
1. 無菌作臺：注意airflow壓力，定期更換紫外線燈管、HEPA過濾膜及prefilter預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。
2. CO2培養(yǎng)箱：CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染。
3. CO2鋼瓶：CO2壓力
4. 恒溫水槽：定期換水

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